Retningslinjer for optøning af celler
- Tø frosne celler hurtigt op (< 1 minut) i et 37°C vandbad.
- Fortynd de optøede celler langsomt, før du inkuberer dem, ved hjælp af forvarmet vækstmedium.
- Plad optøede celler ved høj tæthed for at optimere genopretningen.
- Brug altid korrekt aseptisk teknik, og arbejd i en laminar flow-hætte.
Hvorfor sker optøning af celler?
Det er vigtigt at optø celler korrekt for at bevare levedygtigheden af kulturen og gøre det muligt for kulturen at komme sig hurtigere. Nogle kryobeskyttelsesmidler, såsom DMSO, er giftige over 4 °C. Derfor er det vigtigt, at kulturer optøs hurtigt og fortyndes i kulturmedium for at minimere de toksiske virkninger.
Hvad er processen med optøning?
Optøning er processen med at tage et frossent produkt fra frosset til en temperatur (norm alt over 0°C), hvor der ikke er nogen resterende is, dvs. "optøning". Optøning betragtes ofte som blot en vending af fryseprocessen.
Hvad er den bedste måde at fryse celler på?
Frys cellerne langsomt ved at reducere temperaturen med ca. 1°C pr. minut ved at bruge en kryo-fryser med kontrolleret hastighed eller en kryo-frysebeholder, såsom Mr. Frosty,” tilgængelig fra Thermo Scientific Nalgene labware (Nalge Nunc). Brug altid det anbefalede frysemedium.
Hvordan optøs en primær celle?
Tør ydersiden af hætteglasset af celler med 70 % ethanol eller isopropanol. I et biosikkerhedsskab drejes hætten en kvart omgang for at aflaste det indre tryk og stram derefter igen. Optø hurtigt celler i et 37°C vandbad ved forsigtigt at hvirvle hætteglasset. Fjern hætteglasset, når der er en lille mængde is tilbage.
