Det følgende er en oversigt over de forskellige trin i en protokol for indirekte immunfluorescensfarvning
- Eksperimentplanlægning og prøveforberedelse. …
- Prøvefiksering. …
- Cellepermeabilisering. …
- Blokering. …
- Primær antistofinkubation. …
- sekundær antistofinkubation. …
- Modfarve og montering.
Hvordan udfører du immunfluorescens?
Alle inkubationstrin finder sted ved stuetemperatur
- Vask cellerne to gange, og brug en pincet til forsigtigt at placere dækglasset med opadvendte celler i det befugtede kammer.
- Fiks med 4 % formaldehyd i 10 minutter og vask 3 ×.
- Permeabiliser med 0,1 % TX-100/PBS i 15–20 minutter og vask 3 ×.
Hvordan bruger man immunfluorescens i en celle?
Immunofluorescensprotokol for adhærente celler
- Frø 1–1,5 x104 celler pr. brønd på et 4-kammer objektglas i 500 mL dyrkningsmedium. Inkuber ved 37°C ved 5 % CO2.
- 32–36 timer efter cellepodning, fjern cellekulturmediet og skyl cellerne 3 gange med 500 µL 1X PBS.
Hvad er et eksempel på immunfluorescens?
For eksempel kan en forsker skabe primære antistoffer i en ged, der genkender adskillige antigener, og derefter anvende farvestofkoblede sekundære kaninantistoffer, der genkender gedeantistoffets konstante region (" kanin anti-ged" antistoffer).
Hvad er brugen af immunfluorescensfarvning?
Immunofluorescens (IF)-farvning er en meget brugt teknik i biologisk forskning og klinisk diagnostik IF anvender fluorescensmærkede antistoffer til at påvise specifikke målantigener. Efterfulgt af billeddannelse er det en meget direkte teknik, da du faktisk kan se noget.
